液相色譜（Liquid Chromatography，LC）-核磁共振（Nuclear Magenetic Resonance，NMR）/質(zhì)譜（Mass spectrometry，MS）聯(lián)用系統(tǒng)，是21世紀(jì)以來現(xiàn)代分析化學(xué)聯(lián)用技術(shù)發(fā)展的重要成果。該聯(lián)用技術(shù)整合了高效液相色譜對復(fù)雜樣品體系中有機化合物高效分離、質(zhì)譜對有機化合物的高效靈敏檢測以及核磁共振技術(shù)對有機化合物強大的結(jié)構(gòu)解析能力等優(yōu)點，該技術(shù)自推出以來，已被成功用于天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物雜質(zhì)定性分析能研究領(lǐng)域。眾多成功的案例顯示該技術(shù)強大的分析能力，以及廣闊的應(yīng)用前景。

目前，液相色譜、質(zhì)譜和核磁共振是現(xiàn)代分析化學(xué)的重要分析技術(shù)，商品化的譜儀已廣泛用于科學(xué)研究、工業(yè)生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量控制與質(zhì)量監(jiān)管等領(lǐng)域。液相色譜儀、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用和核磁共振譜儀通常安裝在不同的實驗室，作為不同的儀器系統(tǒng)單獨使用。

圖1 LC-NMR/MS聯(lián)用系統(tǒng)構(gòu)造圖

在儀器配置上，現(xiàn)代LC-NMR/MS聯(lián)用系統(tǒng)由高效液相色譜系統(tǒng)（LC）、在線固相萃取（SPE）、質(zhì)譜（MS）與核磁共振（NMR）等四個獨立的儀器組成。在實際使用中，可根據(jù)研究目的和不同實驗需求分別進入LC、NMR、LC-MS、LC-DAD-SPE-NMR、LC-SPE-NMR/MS等工作模式，從而發(fā)揮不同的實驗效能。

LC-NMR/MS聯(lián)用系統(tǒng)實際上中四種譜儀的組合。除在線固相萃取儀相對少見外，液相色譜和質(zhì)譜儀與常規(guī)實驗室的譜儀完全相同，僅核磁共振在配置上有差異。因超低溫探頭較常溫探頭具有更高的靈敏度，因此本LC-NMR/MS聯(lián)用系統(tǒng)推薦使用配備超靈敏低溫探頭的核磁共振譜儀，以及適用于聯(lián)用使用的插件。理論上講，在配備超低溫探頭核磁共振譜儀的實驗室，增加在線固相萃取儀和聯(lián)用插件等配置，可將現(xiàn)有設(shè)備擴展為LC-DAD-SPE-NMR聯(lián)用。

目前LC-NMR/MS聯(lián)用系統(tǒng)主要用于復(fù)雜樣品體系中微量組分的定性分析，如藥物中微量雜質(zhì)分析，植物化學(xué)等研究領(lǐng)域。

LC-NMR/MS聯(lián)用系統(tǒng)的實驗應(yīng)用一般遵循以下程序。1、建立重現(xiàn)性良好的復(fù)雜樣品體系的液相色譜分離方法，讓盡可能多的色譜峰可到良好分離。2、采用LC-MS工作模式以優(yōu)化后的液相色譜條件對復(fù)雜樣品進行分析，結(jié)合文獻及標(biāo)準(zhǔn)品對色譜中色譜峰進行初步化學(xué)結(jié)構(gòu)推測，包括已知和未知的色譜峰。3、采用LC-DAD-SPE-NMR模式，對需要NMR數(shù)據(jù)進行有機化學(xué)結(jié)構(gòu)解析的色譜峰進行進行多次固相萃?。⊿PE）。根據(jù)化合物性質(zhì)的差異，選用不同吸附填料的固相萃取柱。4、氮氣吹干萃取目標(biāo)色譜峰的固相萃取柱，然后以氘代試劑（如CD3CN）洗脫固相萃取柱，并通過毛細管將溶解有目標(biāo)組分的溶液轉(zhuǎn)移至核磁譜儀內(nèi)。5、對樣品溶液進行NMR測試，包括一維與二維NMR譜的采集。6、MS和NMR數(shù)據(jù)綜合解析色譜峰化學(xué)結(jié)構(gòu)。此程序適用于藥物研究領(lǐng)域主要用于微量雜質(zhì)組分的定性分析。

在植物化學(xué)研究領(lǐng)域，LC-NMR/MS系統(tǒng)還有擴展性的應(yīng)用。通過LC-DAD-SPE-NMR實驗，鑒定色譜中強度較高的色譜峰化學(xué)結(jié)構(gòu)。對確定結(jié)構(gòu)的色譜峰進行質(zhì)譜分析（二級質(zhì)譜），了解化合物的質(zhì)譜特征（質(zhì)譜裂解規(guī)律）。根據(jù)掌握的化合物質(zhì)譜特征對更低強度的同類型化合物的色譜峰進行基于質(zhì)譜技術(shù)的結(jié)構(gòu)鑒定，更充分地認(rèn)識植物化學(xué)成分，有助于植物化學(xué)的深入研究。

LC-NMR/MS聯(lián)用系統(tǒng)購置費用高，對實驗操作人員的實驗技能較高，限制了該技術(shù)的應(yīng)用。該聯(lián)用系統(tǒng)購置費用高昂，常規(guī)實驗室難以承受。最重要的是該聯(lián)用系統(tǒng)對實驗操作人員要求較高，要求實驗人員具有液相色譜、質(zhì)譜和核磁共振波譜學(xué)基本理論知識，熟練質(zhì)譜和核磁共振波譜實驗技能，以及利用質(zhì)譜和核磁共振波譜進行化學(xué)結(jié)構(gòu)解析的能力。

實驗案例1 卡巴它賽降解雜質(zhì)結(jié)構(gòu)分析

卡巴它賽注射液微量雜質(zhì)分析?？ò退愂侵委熐傲邢侔┑囊环N化學(xué)半合成紫杉烷類化合物，最早由賽諾菲公司研發(fā)，于2010年6月獲美國FDA批準(zhǔn)上市。某制藥公司在仿制該藥的過程中，在注射液質(zhì)量控制階段中發(fā)現(xiàn)未知雜質(zhì)色譜峰，而原料藥中并無該雜質(zhì)峰，初步判斷為生產(chǎn)工藝中產(chǎn)生該雜質(zhì)。采用高分辨質(zhì)譜技術(shù)發(fā)現(xiàn)，未知雜質(zhì)色譜峰與API卡巴它賽具有質(zhì)量分子量，判斷為同分異構(gòu)體，但查閱文獻未見該雜質(zhì)的任何文獻報道。最終，采用LC-NMR/MS聯(lián)用技術(shù)，采集一維與二維NMR譜，確定雜質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測為卡巴它賽中六元環(huán)重排產(chǎn)生的雜質(zhì)。

圖2 卡巴它賽注射液液相色譜圖